恒溫恒濕培養(yǎng)箱怎么測定水中土壤菌群
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1、測定過程
1.1水樣的收集
1.2用無菌采樣瓶收集被測樣品,在采樣過程中,要維護(hù)瓶口和瓶頸,避免這些部分受雜菌污染。瓶內(nèi)要留下足夠的空間,以備測定之前搖晃。
1.3若收集的水中有余氯,應(yīng)于采樣前在無菌操作下于無菌采樣瓶中加人滅過菌的硫代硫酸鈉,加人量為每升水樣約0.1g。
1.4水樣收集后應(yīng)立即進(jìn)行測定,如果2h內(nèi)不能進(jìn)行測定,應(yīng)把水樣放在冰箱中,于4℃~10℃保存,保存時(shí)刻不宜超越24h。經(jīng)冷凍保存后的水樣需測守時(shí),從冰箱中取出于30℃左右活化4h~5h,再進(jìn)行測定。
1.5無菌箱(室)滅菌,把試驗(yàn)所用的無菌稀釋水、無菌培育皿、無菌吸管等用品放人無菌箱(室)內(nèi),打開紫外線燈滅菌30min。
1.6水樣的稀釋和接種,關(guān)掉紫外線燈,打開熒光燈,將待測水樣放人無菌箱(室)中,立即用75%的乙醇溶液浸泡的醫(yī)用脫脂棉球擦手,點(diǎn)著無菌箱(室)內(nèi)的酒精燈。
以下對水樣的稀釋和接種條的操作應(yīng)在無菌箱(室)內(nèi)的火焰區(qū)進(jìn)行。
1.7選擇適合的稀釋度,應(yīng)使最后一個(gè)稀釋度接種后培育皿中生長的菌落數(shù)小于300個(gè),在空白稀釋水樣瓶上標(biāo)上稀釋度數(shù)。
1.8用10倍稀釋法稀釋水樣,即用5mL無菌吸管汲取5mL水樣注入到45mL空白稀釋水中充沛搖勻,此刻稀釋度為10-1.
1.9另取一支5mL無菌吸管汲取5mL10-1水樣移人到第二個(gè)稀釋水中,充沛搖勻,此刻稀釋度為10~2,順次類推,直至需求的稀釋度為止。
1.10將不同稀釋度的水樣分別接種到無菌培育皿中,每個(gè)稀釋度重復(fù)接種3~5個(gè)皿,每皿接種1mL,接種時(shí)左手掌托住培育皿,大拇指和食指輕輕將培育皿提起,吸管與培育皿底成45°角相接。移開吸管時(shí)吸管不宜再碰到培育皿。接種時(shí)刻不宜超越4s。每接種一個(gè)稀釋度更換一支無菌吸管。另取一組培育皿不接水樣,作為空白。同時(shí)操作。
1.11將滅過菌的培育基冷卻至(45士1)℃,掀開培育皿蓋,將培育基灌入培育皿內(nèi),每皿應(yīng)灌15mL~20mL。灌皿時(shí)不要使培育基直接灌在水樣上,灌皿后要將融化的培育基和皿中水樣*混合, 小心勿使混合液濺到培育皿的邊際, 測定一個(gè)水樣從接種到灌皿不得超越20min。
2、培育
待培育皿中培育基固化后,倒置平皿,在恒溫恒濕培養(yǎng)箱中29℃培育72h。